glutatyon veya GSH bitki ve hayvanlar bulunan bir proteindir. Bu çevresel kirleticilerindetoksifikasyon enzim reaksiyonları yardımcı olmak için çalışır . Buna ek olarak , bu hücreler içinde amino asit olarak taşınmasını kolaylaştırmaktadır ve protein sülfhidril indirgeme reaksiyonları korumaya yardımcı olur. GSH Tahlil protokolleri GSH tamponlar, standartlar , substrat , enzimler ve reaktif kullanınız. Belirli bir prosedür takipdeneyi sonucu için uygun olan. Enzimatik Geri Dönüşüm Yöntemi

enzimatik dönüşüm yöntemi , GSH için , GSH ölçmek için glutatyon redüktaz kullanır. Bu protokol, plazma, doku ya da kültürlenmiş hücre numuneleri içindir. GSH ilereaktif DTNB (5- 5′ -ditio -bis- 2 -nitrobenzoik asit ) eklenir. GSHsülfhidril grubunun,bir reaktif ile reaksiyona girer ve 5-tiyo- 2 -nitrobenzoik asit ( TNB ) adı verilen bir sarı asit üretir. GSH geri dönüşüm ve daha fazla asit üretmek için asit ve GSH karışımına glutation redüktaz ekleyin . Bu prosedürde, asit üretiminin oranı GSHdönüşüm reaksiyonu ile orantılıdır ; Bu nedenle , bir spektrofotometre kullanılarakTNB asidin içine çekmeyi ölçmek . Absorbansnumunedeki GSHgerçek miktarın bir tahmin sağlar .
Karaciğer Hücre Glutatyon Tahlili

Bu protokol , insan hepatokarsinoma GSHmiktarını ( karaciğer kanseri analizleri ) hücreleri. Bu yordamı gerçekleştirmek GSH azaltmak ve okside GSH tayini içinkolorimetrik yöntemi kullanın .

Renkli ürün 2 – nitro-5- tiobenzoik asit ve oksitlenmiş glutation ( GSSG ) oluşturmak için 5- 5′- ditiyobis ( 2 -nitrobenzoik asit veya bunların DTNB ) ile GSH azaltın. Tekrar oluşturulması için GSH GSSG azaltmak için glutatyon redüktaz kullanın . Karaciğer hücrelerinde GSHmiktarını ölçmek amacıyla , bir mikrolevha okuyucu kinetik 415 absorbanstaörnek okudum .
Hücre Apoptoz

olarak protokol , GSH indirgenmiş GSH azalmanınölçümü ile hücre apoptozu (ölüm) tespit etmek için kullanılır . Hücresel GSHkonsantrasyonunda bir azalma hücre ölümünün bir göstergesidir. Non – floresan thiolite yeşil ileörnek hücreleri leke . Thiolite yeşil hücrenin sitoplazmasında (hücre plazma) ve mitokondri ( güç ) birikir. Hücrelerde GSHmiktarını görselleştirmek için 490/520 nanometre sitometresiyle akışını kullanın .
Hayvan ve Bitki Örneklerinin GSH toplam Konsantrasyon

konsantrayonuna ölçün farklı hayvan ve bitki örnekleri hem de indirgenmiş ve oksitlenmiş formda toplam GSH . Genel tiol reaktif , 5- 5′- ditiyobis [2 -nitrobenzoik asit ] ekleyin . Tiyol reaktif 412 nm kromofor , 5- thionitrobenzoic asit ( TNB) ve GS -TNB oluşturulması için GSH ile reaksiyona girer. GS -TNB azaltmak glutation redüktaz ve Beta – nikotinamid adenin dinükleotid fosfat ( NADPH ) ilave edin. Glutatyon ayrıca ikinci TMB molekül serbest veGSH geri dönüşüm olacaktır . Buna ek olarak, disülfid reaksiyonundan fromedkarışımı içinde mevcut olan herhangi bir oksitlenmiş GSH ( GSSG ) , aynı zamanda GSH indirgenir. Absorbans okuma düzeyi ve GSHtoplam konsantrasyonunu göstermek için 405 nanometre bir mikrolevha okuyucu kullanın .