Glutatyon, ya da GSH , sistein , glutamat ve glisin yapılan elzem olmayan bir tripeptide . Vücuttaki çeşitli metabolik süreçlerin sonucu olarak moleküler oksijen oluşturulmaktadırROS zararlı etkileri ya da reaktif oksijen türlerinin, vücudun hücreleri ve organları , koruyan güçlü bir antioksidandır. Glutatiyon gibi antioksidanlar ,ROS ve onları nötralize ile etkileşim ve hücrelerdeDNA ve protein zarar vermesini engeller. Vücudunuzdaki GSH okside ve düşük formununoranı Sen santrifüj
Sodyum heparin < br
Syringe
Kelebek iğne
ihtiyacınız olacak sizin body.Things deROS – oksidatif strese bağlı göstergesidir > sülfosalisilik asit Daha Talimatını göster

GSH standart çözelti
GSH Reaksiyon Agent
MICROPLATE
Işık kaynağı
Dondurucu 1 Berabere

yaklaşık 2 bir 5 ml şırıngaya bağlanmış bir 23 gog kelebek iğne ile anticubetal ven delme ile kan ml. Sodyum heparin ihtiva eden tüpler test hafifçe karıştırma tüpü ters için örnek ekleyin .
2P beş dakika boyunca dakikada 2500 devirdesantrifüj ile örnek kırmızı kan hücrelerini toplamak. Dondurma ve hücreleri kırmak için bir numune üç kez eritin. 12,000 rpm’de 10 dakika 4 ° için hücre lisatı solüsyonu santrifüj ve supernatant toplamak .
3

yüzde 5 sülfosalisilik asit ekleyerek ve enörnek santrifüj ile numunedenproteini çıkarın 4 derecede beş dakika süreyle 12,000 rpm . -112 Derecegiderildi süpernatan saklayın.
4

bir tiyol saptama maddesi , GSH redüktaz ,GSH , reaksiyon karışımı yapmak için kit üretici tarafından belirtilen oranlarda nikotinamid adenin dinükleotid fosfat ve deney tamponu karıştırın. Her kimyasalmiktarı gerçekleştirmek niyetinde testlerinsayısına bağlıdır . 16, 32 , 63, 125, 250 ve 500 mikrolitre konsantrasyonlarını elde etmek için yüzde 5 sülfosalisilik asit içindeGSH reaksiyon karışımı seyreltin.
5

kuyularagiderildi kan örneğinin 1-10 mikro litre ekle bir mikroplaka . 10 mikrolitre de her birinin toplam hacmi getirmek için her bir oyuğa ,test kiti kullanılabilir seri halinde seyreltilmiş GSH standart solüsyonu ekleyin.
6

yapılan GSH Reaksiyon karışımının 90 mikrolitre ekleme de bir mikrolevhadaki her için Adım 4’te . 30 saniye için plaka sallayarakreaktif karıştırın.
7

405 ve 415 nanometre dalga boyu ışık altında,plaka yerleştirerek hemen absorbansı ölçülür. 30 dakika boyunca inkübe edin. İnkübasyon sırasında her beş dakika sonra absorbans değerlerini alınız.
8.

yüzde 5 sülfosalisilik asit ve trifluromethane sülfonat çözeltisi ileişlenmiş örnek sulandırır 6. millimolar . Bu çözeltiden tüm indirgenmiş GSH kaldırır. Mikroplaka kuyulara bu çözeltinin 10 micoliters 1 ekleyin ve adım 5 , 6 ve 7 yineleyin. Bu örnekteki okside GSH miktarını tahmin yardımcı olacaktır.
9

absorbansı ve örnek Plot Her iki indirgenmiş ve oksitlenmiş glutation için GSH eğrisi elde etmek için , bir grafikte konsantrasyonu . GSH iki biçimleri arasındakioranını hesaplayın. Artmış seviyeleri GSH oksidatif stres ve ROS işaret oksidatif .